| 月 日 |
| 内 容 |
| 大腸菌プラスミドDNAの分析 |
ALDH２遺伝子の検出 |
|
| 8/11(月) |
(1) 大腸菌の培養・
・授業で，ＧＦＰ（蛍光タンパク質）遺伝子を導入した大腸菌保存株を液体培地に移し，増殖させる |
(1) ＤＮＡ抽出
・各自，頭髪数本を採取し，酵素により溶解・溶解したものからDNAの抽出，精製
(2) ＰＣＲ反応
・ＤＮＡポリメラーゼ，プライマー等を加えサーマルサイクラーにセットし，目的遺伝子の増幅を行う |
|
| 8/12(火) |
(2) プラスミドＤＮＡの抽出
・ＧＦＰ遺伝子を含むプラスミドＤＮＡを大腸菌の菌体から抽出する
(3) 電気泳動によるＤＮＡの分離
・アガロースゲルにサンプルをローディングし電気泳動
・トランスイルミネーターにてＤＮＡのバンドを確認
(4) 制限酵素による切断
・プラスミドＤＮＡをHindⅢ(制限酵素の一種)で切断
(5) 切断ＤＮＡの確認
・制限酵素処理前後のＤＮＡを電気泳動し，資料の制限酵素地図と一致する事を確認
(6) 大腸菌の形質転換（デモ）
・抽出したプラスミドＤＮＡを，再度大腸菌に導入するデモンストレーション
(7) プラスミドＤＮＡのシークエンス（デモ）・抽出したプラスミドＤＮＡの塩基配列を決定する操作のデモンストレーション |
|
|
| 8/13(水) |
(8) ＤＮＡシークエンス結果の解析
・得られたＤＮＡの塩基配列を既知のデータと比較し，その特性を学ぶ |
(3) 増幅したＤＮＡの電気泳動
・１日目に増幅したＤＮＡを電気泳動し，各自のＡＬＤＨ２遺伝子の遺伝子型を確認した |
|
